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新型冠狀病毒核酸檢測原理和檢測流程
來(lái)源：xujinping 瀏覽 1120 次 發(fā)布時(shí)間:2022-10-09
檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見(jiàn)的是熒光定量PCR（聚合酶鏈式反應）。因PCR反應模板僅為DNA，因此在進(jìn)行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中，包含一對特異性引物以及一個(gè)Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅熒光基團。探針完整時(shí)，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；如反應體系存在靶序列，PCR反應時(shí)探針與模板結合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報告基團與淬滅基團分離，發(fā)出熒光。每擴增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子產(chǎn)生。熒光定量PCR儀能夠監測出熒光到達預先設定閾值的循環(huán)數（Ct值）與病毒核酸濃度有關(guān)，病毒核酸濃度越高，Ct值越小。不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品會(huì )依據自身產(chǎn)品的性能確定本產(chǎn)品的陽(yáng)性判斷值。
對于新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說(shuō)明書(shū)”樣本要求“部分進(jìn)行樣本采集，常規的樣本類(lèi)型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。
獲得患者樣本后，需盡快進(jìn)行檢測，如無(wú)法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行低溫封裝，并送到專(zhuān)門(mén)的檢測機構進(jìn)行檢測。檢測機構收到樣本后，對樣本進(jìn)行核酸提取，核酸提取試劑應使用批準產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中指定的核酸提取試劑盒。
病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進(jìn)行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批準產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中指定的熒光定量PCR儀，通過(guò)熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。
上述過(guò)程中樣本的采集、保存、轉運，樣本核酸的提取和檢測、結果的判讀均須嚴格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。